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“黑膠蟲”污染解決方案

    黑膠蟲”是近十幾年才發(fā)現(xiàn)的一種細胞污染物,“黑膠蟲”的分類目前尚無鑒定確認。

“黑膠蟲”可寄生于動物細胞,也可以生存于培養(yǎng)基中,依靠細胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生,并隨細胞傳代而傳代?!昂谀z蟲”與細胞競爭性生長,開始時對細胞并沒有什么影響,但當黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候, 細胞生長就會受到影響直至死亡,嚴重影響了科研活動的開展和進行。所以“黑膠蟲”的污染常在培養(yǎng)條件改變、細胞接種密度降低、細胞狀態(tài)不佳時顯現(xiàn)并使實驗中斷,尤其在凍存細胞復蘇時可造成大量細胞死亡。

目前比較公認的觀點認為“黑膠蟲”是一種微生物,增殖緩慢但對細胞有損害,數(shù)量達到一定程度可引起細胞死亡,其來源可能是細胞本身的污染或從動物取材時污染造成的。該污染在全世界細胞實驗室中普遍存在,解決該問題是一個世界性難題。

關(guān)于是什么問題的討論

A. 玻璃培養(yǎng)瓶中的類似氧化硅的東西(曾經(jīng)有文獻報道過)

B. 據(jù)說這是黑膠蟲,又有人說是原生動物,好像也沒個統(tǒng)一的說法

C. 據(jù)病毒所和軍科院鑒定是一種寄生于牛血清內(nèi)的一種原蟲,似乎和草履蟲和變形蟲有類似之處,然而由于課題經(jīng)費不夠而不能繼續(xù)進行下去。

D. 有人說是納米級的細菌

其他的特點

(1)形態(tài)上有些像細菌,直徑約在0.5~1微米,

(2) 在400X倒置顯微鏡小,有典型的布朗運動(不規(guī)則的原地小距離抖動)。

(3) 細胞內(nèi)好像也有人存在

(4) 但并不引起培養(yǎng)液混濁

(5) 時間稍長,細胞狀態(tài)明顯惡化,最后死亡

大家的處理:

1.換好一點的血清(我覺著和血清的關(guān)系不大)。

2.如果是貼壁細胞的話,可用無菌的PBS洗幾次,可一定程度上緩解。若是懸浮的話,就不太好處理啦,可以向其中少加一點滋養(yǎng)細胞(從小鼠腹腔內(nèi)取得巨噬細胞,這種細胞不分裂,過一陣就死掉了,做抗體雜交瘤融合的同志肯定知道)。加滋養(yǎng)細胞對有黑膠蟲的剛復蘇的細胞很有效!還有就是實驗環(huán)境要注意好,保持細胞間整個環(huán)境的潔凈度。

3.換用進口的一次性塑料培養(yǎng)瓶。

4.建議清理無菌室所有物品,重新滅菌,用KMnO4熏蒸,按首次使用無菌室做,細胞重新復蘇。

5. 在換液前先加入生理鹽水并輕輕拍打,沖洗干凈后再加入培養(yǎng)液,堅持天天洗,傳代時加生理鹽水再離心一次,接種密度稍大一些,一段時間后,蟲子就會大大減少,對細胞的生長也不會有大的影響。

6.有材料稱minocycline具有一定的作用,可以和換液結(jié)合起來使用。

在細胞培養(yǎng)實驗中,人們遇到的黒膠蟲并不都是一樣的,有像細菌的、有像支原體的、有像原蟲的、有像真菌的,還有像細胞碎片的。在國內(nèi)各實驗室的器材條件參差不齊,而且實驗人員的操作質(zhì)量也不盡相同,同一種現(xiàn)象也可能有些許差異,當用描述出來的現(xiàn)象的差異可能變大也可能變小。所以很多人看到細胞被細菌污染了,不好處理,而且描述出來的現(xiàn)象和流傳的黑膠蟲類似,就會把培養(yǎng)失敗的原因歸結(jié)到無法處理的黒膠蟲污染,甚至可能說它發(fā)現(xiàn)的是真正的黑膠蟲。這樣的事情多了,黑膠蟲就會人為的變種,像什么的都有。黑膠蟲是否存在,還有待于科學的發(fā)展。但有一點可以肯定的,大部分人發(fā)現(xiàn)的“黒膠蟲”并不是真正那個未知的黒膠蟲,而是不很常見的細菌、真菌、原蟲等微生物污染。

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1、青霉素-鏈霉素-兩性霉素B溶液(100×) BC-CE-012

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兩性霉素B(Amphotericin B),為多烯類抗真菌藥物。對本品敏感的真菌有新型隱球菌、皮炎芽生菌、組織胞漿菌、球孢子菌屬、孢子絲菌屬、念珠菌屬等。

2、鹽酸環(huán)丙沙星溶液(20mg/mL) BC-CE-014

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環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin)屬于一種高效廣譜抗生素,CAS號為85721-33-1,分子量為331.35。環(huán)丙沙星抑菌原理在于抑制細菌DNA解旋酶,阻止細菌復制,所以快速降低細菌繁殖,是殺菌型抗菌藥。環(huán)丙沙星作用方式特殊,除喹諾酮類外,與其它任何抗生素不同。因此,環(huán)丙沙星對青霉素類,頭孢菌素類,氨基糖甙類和四環(huán)素類耐藥菌珠均顯較高抗菌能力。

3、支原體清除試劑 BC-CE-019-10mL

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成分:分別是大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和四環(huán)素類衍生物。